在生物医学研究中，无论是进行体外慢病毒文库构建，还是体内的AAV文库实验，如何确定最佳剂量以确保一个靶点仅进入一个细胞，一直以来都是科学工作者面临的难题。文库实验的目标是识别单基因所引发的功能变化，因此控制每个细胞仅感染一个带有靶点的病毒至关重要。

在细胞实验中，文库筛选的推荐做法是首先使用对照病毒进行预实验，以探索最佳MOI（感染效率可达80%的MOI）。具体操作中，文库的MOI应设定为最佳MOI的三分之一，从而大幅减少病毒用量，以控制每个细胞的感染数量。这一策略尤其适用于普遍的细胞类型。然而，对于免疫细胞等难以感染的细胞，或体内实验而言，确定最佳剂量仍然是一项挑战。例如，最佳MOI的感染效率有时可能仅为30%，若将其用量减至三分之一，则几乎无法获得有效感染的细胞。

为了解决这一问题，吉凯推出了三色荧光病毒（mTagBFP、Venus、mCherry），这类病毒将有助于科研人员更好地进行文库感染的预实验。三色荧光病毒包括慢病毒和AAV两种类型，相关的研究参考了文献《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》。在这项研究中，作者通过体内滴定实验来测试AAV在低感染复数下是否能感染多种细胞，制备了三种不同剂量的AAV（分别为25E9、5E9、5E10颗粒数），并使用采用CBh启动子独立表达mTagBFP、Venus和mCherry的病毒构建方案。

研究表明，通过流式细胞分析，可以确定在低剂量下双病毒感染同一细胞的可能性，从而找出最佳剂量。最终，选择5E9的剂量，因为该剂量下单个AAV感染的细胞数量达到最大化。

无论是在细胞实验还是动物实验中，三色荧光病毒都可以用于相关的预实验。科学家可以通过设置不同的剂量梯度进行细胞感染（参考慢病毒感染操作手册）或进行小鼠体内注射（参考动物注射文献），以便在不同剂量下流式分析转染效率及单荧光细胞的比例。最终得出单病毒感染比例最高且感染细胞数量最多的剂量，即可设为最佳实验剂量。

在生物医学的研究与应用中，选择合适的病毒载体和最佳实验条件，像鸿运国际这样的大品牌提供的工具和资源，将有助于研究的成功进展与创新，为科学家们提供了更加高效的实验方案。