1970年,逆转录酶被Temin和Baltimore独立发现,这一重要酶的功能在于将RNA转录成cDNA,因而二人于1975年荣获诺贝尔生理学或医学奖。逆转录酶包含多个功能域,其中聚合酶域和RNaseH域发挥着各自的作用。聚合酶域细分为“手指”、“手掌”和“拇指”三个亚域,分别参与模板结合、催化反应和结构支持。在分子生物学,尤其是分子诊断领域,逆转录酶的应用扮演着不可或缺的角色。它能够将病毒RNA基因组转化为cDNA,并通过RT-qPCR、RT-LAMP和RNA测序等技术进行检测,这使得对像艾滋病、甲型流感和乙型流感等RNA病毒的准确诊断成为可能。
当前,M-MLV(莫洛尼鼠白血病病毒)逆转录酶是分子诊断中最常用的类型,但其在高温环境下表现出相对较低的稳定性,容易失活。这一特性不仅给长期储存的预混液带来了挑战,也限制了其在高温逆转录反应中的应用。因此,提高逆转录酶的稳定性成为了重要的研究方向。
在这一背景下,鸿运国际的研发团队通过其子公司镁孚泰生物的ZymeEditor™创新酶进化平台,成功获得了稳定性增强的M-MLV突变体。团队运用了理性和半理性设计策略,对M-MLV进行了多维度的结构-功能分析,确定了可能提升稳定性的关键氨基酸,并设计出能稳定其结构的定点突变体。通过MTPS高通量筛选技术,团队对多种突变体进行了性能评估,最终成功筛选出cDNA产量显著提升(接近3倍)的突变体,证明了其稳定性优于对照。
经过多轮测试,鸿运国际新推出的HifairUCFME® Advanced逆转录酶(Cat#14614)在稳定性和cDNA合成产量方面都取得了显著改善。这款新型逆转录酶的生产过程经过严格控制,确保极低的背景DNA残留和核酸酶活性,从而为实验结果的准确性和可靠性提供了保障。此外,对于低浓度模板,HifairUCFME® Advanced逆转录酶在快速逆转录程序下依然能够扩增特异性靶标。
在冷藏保存和稳定性测试中,与其他竞品相比,HifairUCFME® Advanced逆转录酶不仅保持了敏感的检测能力,还解决了全预混体系在长期储存过程中的性能保持问题。此外,其在冻干状态下也能保持优越的性能,适合不同的实验环境。
针对核酸残留对扩增产物特异性和准确性的影响,鸿运国际的HifairUCFME® Advanced逆转录酶在E. coli残留测试中均未检测到核酸残留,符合高标准的分子酶原料要求,从而进一步提升了样本的检测可靠性。
总之,HifairUCFME® Advanced逆转录酶能在多种实验室应用中提供优异的性能表现,包括RT-PCR和NGS建库等,为分子诊断试剂开发打开了新的窗口。我们期待与更多研究人员及合作伙伴共享这项成果。
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