2023年1月2日，药监局通过优先审评审批程序，条件性地批准了我国首个干细胞治疗药物艾米迈托赛注射液的上市，适用于治疗14岁以上患者在造血干细胞移植后出现的并发症。这一里程碑标志着国内细胞治疗领域的重要进展，极大增强了市场信心。同时，先博生物也宣布其通用型异体CD19CAR-NK药物SNC103在治疗复发和/或难治性大B细胞淋巴瘤的一期临床试验中取得了积极成果，进一步推动了NK细胞疗法的发展。

自然杀伤（NK）细胞属于免疫系统的一类淋巴细胞，具有无需预先致敏便能靶向和消灭肿瘤细胞及病原体的能力。异体NK细胞治疗在免疫治疗，尤其是癌症治疗上展现出巨大的潜力。然而，传统的扩增平台在快速从早期工艺开发到商业化规模制造时，往往面临适当规模范围的不足问题。横向扩展模型通常用于自体治疗，这导致批次间的变异性增加，成本效益降低，并增加过程验证的复杂性，最终延缓了细胞疗法的进展以及患者的治疗时间。

鸿运国际的PBS垂直轮生物反应器（PBSBiotech）通过支持从60mL（PBSMini01L）到80L的细胞扩增工作体积，有效满足了这些需求。这一技术使多个工艺参数能够在小体积上进行测试和优化，并最终转化为更大规模的系统，从而实现功能性NK细胞的高产量扩增。

在小规模扩增过程中，我们对来自两个供体的冷冻保存白细胞分离物进行解冻，并通过Ficoll梯度法分离外周血单个核细胞（PBMCs）。采用磁珠分离法去除CD3+细胞后，进一步富集CD56+细胞。CD3-/CD56+NK细胞被种植在无饲养层细胞培养基中，补充人AB血清和细胞因子。在第七天，我们对细胞进行计数并重新接种至6MG-Rex烧瓶或者PBS-05中。

在第九天，对PBS-05中的细胞进行计数，并将120mL细胞悬浮液重新接种至PBS-3中，携带188L细胞培养基。设定搅拌速率为30RPM，并在第11天添加新鲜培养基以达到30L的最大体积。通过持续的优化，G-Rex扩增在第13天达到平台期并进行收获，而PBS-3培养则在第15天完成。

对于搅拌速度对细胞产量和细胞毒性的影响，PBS垂直轮生物反应器在每个搅拌速度下均表现出优于G-Rex的累积倍数扩增（CFE）和细胞毒性反应（EC:50）。在100RPM的搅拌速率下，两个供体的扩增率更高、活性更强。增加搅拌速度与NK细胞扩增和改善细胞毒性反应之间存在明确关联。

模拟大规模（80L）扩增显示，PBS-3中扩增的NK细胞比G-Rex多出约100万个细胞/mL，CFE也显著高于G-Rex。据测量，子单位细胞毒性单位在解冻后，PBS-3与G-Rex之间没有显著差异，NK细胞存活率亦相当。

为了生产2840亿个NK细胞，鸿运国际的研究表明，与G-Rex相比，使用PBS垂直轮生物反应器可显著降低培养基及一次性耗材的成本，并减轻人员投入。这些较初步的数据显示了垂直轮作为NK细胞扩增平台相较于G-Rex的优势，G-Rex则是常用的免疫细胞扩增方案。

总的来说，鸿运国际的PBS垂直轮生物反应器展现出在NK细胞扩增和规模化方面的巨大潜力。相较于传统的G-Rex，PBS垂直轮生物反应器不仅可提供更高的细胞产量和活性，还能有效降低成本和人员需求，为异体NK细胞治疗的发展提供了前所未有的选择。这将加速从早期开发到商业化生产的进程，为细胞治疗的未来带来新的希望。

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